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檢測細胞凋亡的三種常用方法,您知道幾種?

提供者:上海恒遠生物科技有限公司   發布時間:2019/10/25  閱讀次數:80次   進入該公司展臺

     人體內的細胞注定是要死亡的,有些死亡是生理性的,有些死亡則是病理性的,有關細胞死亡過程的研究,已成為生物學、醫學研究的一個熱點,身為一位科研工作者,對細胞凋亡的幾種檢測方法都應該有所了解!今天上海恒遠為大家整理了相關內容,希望能夠幫到大家。
 
    一、形態學觀察方法
 
    1.HE染色、光鏡觀察:凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團塊狀,細胞表面有“出芽”現象。
 
    2.丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:醫學教/育網搜集整理活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側,可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。
 
    3.臺盼藍染色:如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性,區別壞死細胞有一定的幫助。
 
    4.透射電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨毛消失,核染色質固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質緊實,細胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現象。
 
 
    二、DNA凝膠電泳
 
    1.檢測原理
 
    細胞發生凋亡或壞死,其細胞DNA均發生斷裂,細胞內小分子量DNA的片斷增加,高分子DNA減少,胞質內出現DNA的片斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有規律的發生在核小體之間,出現180-200bpDNA的片斷,而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細胞的死亡,并可與壞死細胞區別。
 
    2.結果判斷
 
    正常活細胞DNA 電泳出現階梯狀(LADDER)條帶;壞死細胞DNA電泳類似血抹片時的連續性條帶。
 
    三、酶聯免疫吸附法(ELISA)核小體測定
 
    凋亡細胞的DNA斷裂使細胞質內出現核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA的片斷組成,可由ELISA法檢測。
 
    1.檢測步驟
 
    1.1.將凋亡細胞裂解后高速離心,其上清液中含有核小體;
 
    1.2.在微定量板上吸附組蛋白體;
 
    1.3.加上清夜使抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結合;
 
    1.4.加辣過氧化物酶標記的抗DNA抗體使之與核小體上的DNA結合;
 
    1.5.加酶的底物,測光吸收制。
 
    2、用途
 
    該法敏感性高,可檢測5*100/ml凋亡細胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡檢測。該法不需要特殊儀器,適合基層工作,但是不能測定凋亡細胞發生的絕多對量。
 

關鍵詞:ELISA試劑盒  

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