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免疫組化的二抗還有區別的么!要怎么選?

提供者:上海古朵生物科技有限公司   發布時間:2019/10/25  閱讀次數:49次   進入該公司展臺

免疫組化大家基本上都做過,你知道有二抗,也應該知道免疫組化的原理就是一抗結合到目標蛋白,再有二抗來進行信號放大,大概是這樣:

但是你知道二抗的信號放大實際上有多種方法……這就需要你進行二抗標記方法的選擇,最簡單的二抗標記方法是直接法:

就是直接在二抗上標記酶,比如HRP,來進行顯色,這樣的二抗實際上很便宜,但是缺點就是靈敏度低,好多低豐度的蛋白,結合不上,免疫組化染出來的效果就不太好。

第二種方法,叫做PAP,比如二抗標記了HRP,他們就在孵育二抗后,再孵育一種能結合HRP的一抗,就像這樣:

這種方法靈敏度是上去了,但是非特異性增高了,于是被主流淘汰了。

第三種方法被稱為ABC法或者SABC法,主要是在二抗上標記生物素,孵育二抗后,加入親和素以及標記了HRP的生物素,以這樣的聚合方式,來進行信號的放大作用:

這種方法的優點是能夠成倍提高靈敏度,但同時也會提高非特異性,于是就產生了第四種方法,LSAB法標記的二抗:

這種方法,直接在親和素上加上HRP標記,靈敏度也很高,同時降低了SABC法的非特異性。而且,LSAB法在實驗的時一般孵育時間短(通常就10分鐘)。

但SABC法和LSAB法在實驗過程中會需要進行內源生物素封閉,會麻煩一些。為了省去麻煩,就產生了第五種標記方法,也就是Polymer法,就是在二抗上標記聚合的HRP:

這樣二抗的信號就得到了放大,靈敏度也提高了,但Polymer法、SABC法、LSAB法,都不能用于定量實驗,只能用在IHC上。

那免疫熒光呢?免疫熒光主流是采用直接法、LSAB法,以及直接標記或者LSAB標記的三抗來進行信號放大的。總結一下,就是直接法的二抗便宜但是靈敏度差;PAP法基本已經淘汰,LSAB和SABC法的靈敏度高,但是貴,步驟多;Polymer法靈敏度高,步驟簡單,但是貴。

關鍵詞:生物試劑  古朵生物  

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